Окрашивание волос включает в себя следующие этапы Гутыря Л.Г. Парикмахерское мастерство - М., 2009:

• - подбор красителя;
• - тест на восприимчивость красителя;
• - подготовка к окрашиванию;
• - нанесение краски;
• - выдержка;
• - смывание краски.

Подбор красителя.

Чтобы определить свой тип волос, необходимо приподнять пряди и рассмотреть их при дневном освещении, поскольку в общей массе волосы кажутся более темными.

После химической завивки обычно применяют тонирующие препараты. Они не только делают цвет более ярким, но и улучшают структуру волос.

При окрашивании в натуральный цвет следует учитывать ряд правил: волосы у корней всегда должны быть темнее, чем на концах, волосы спереди необходимо сделать светлее, чем сзади, а верхние - чуть светлее нижних.

Тест на восприимчивость препарата.

Если есть склонность к аллергии, необходимо провести тест на восприимчивость к данному типу красителя следующим образом:

• - небольшое количество препарата наносят на кожу за ухом;
• - краситель оставляют на 24 часа;
• - если кожа покраснела или появилось раздражение, значит, от препарата следует отказаться.

Подготовка к окрашиванию.

Перед окрашиванием голову не следует мыть, чтобы сохранилась жировая прослойка, которая предохраняет волосы и кожу головы. Очень грязные волосы следует вымыть один раз шампунем без бальзама. Остатки средств для укладки лучше удалить с помощью расчесывания.

Правила нанесения краски.

Правило 1. Кожа лица.

Кожу по краям волос смазывают жирным кремом, маслом или вазелином.

Правило 2. Перчатки.

При окрашивании используют специальные перчатки, поскольку краска неблагоприятно воздействует на кожу рук и ногти.

Правило 3. Инструменты.

Мисочки для разведения краски, а также инструменты для нанесения препарата, должны быть пластмассовые или керамическими, поскольку при реакции красителя с металлом образуются соединения, которые отрицательно влияют на волосы и качество краски.

Правило 4. Смешивание краски.

Краску смешивают непосредственно перед ее нанесением.

Правило 5. Нанесение краски.

Волосы деля на 4 зоны, проводя через макушку два перпендикулярных пробора. Краситель сначала наносят по проборам, а затем на затылочную зону, так как она холоднее, и окраска будет происходить менее интенсивно. На виски и волосы надо лбом, краску наносят в последнюю очередь, поскольку там самые тонкие волосы и они быстро ее воспринимают. Если какие-то пряди необходимо сделать светлее, чем другие волосы, сначала наносить краску нужно именно на них.

Правило 6. Нанесение красителя красного тона.

Если производится окраска интенсивными красными тонами, краску наносят на волосы по всей их длине, отступив от корней на 2-3 см. После того как волосы пропитаются, краситель наносят на корни и на кончики.

Правило 7. Время нанесения.

Наносить краску нужно точно и быстро, чтобы цвет получился равномерным. Вся процедура нанесения не должна превышать 10-15 минут.

Правило 8. Толщина прядей.

Чем гуще и толще волосы, тем тоньше должны быть пряди, на которые наносится краска. Тогда она сможет пропитать каждый волос.

Правило 9. Повторное окрашивание.

Если окрашивание производится повторно, смесь следует наносить точно, чтобы она не попала на ранее окрашенные волосы и они не пострадали.

Правило 10. Резиновая шапочка.

На голове после нанесения краски должен образоваться своего рода панцирь, который создаст парниковый эффект и будет препятствовать выходу свободного кислорода. Для этого на голову надевают специальную полиэтиленовую или резиновую шапочку.

Выдержка.

Нужно соблюдать точное время выдержки. Оно отсчитывается после нанесения красителя.

При постельном тонировании - 15 минут.

При нормальной окраске тон в тон или на тон светлее (темнее) - 30-50 минут.

При сильном осветлении - 50 минут, иначе краситель не сможет проявиться полностью на волосах.

Смывание краски.

Перед смыванием красители необходимо проверить, хорошо ли прокрасились волосы. Для этого обушком расчески отодвигают краску на корнях и концах волос и сравнивают их.

Когда достигается нужный цвет, необходимо провести эмульгацию. Для этого на волосы наносят небольшое количество теплой воды, слегка вспенивают ее и распределяют по всей поверхности головы, производя массирующие движения по линии роста волос.

После этого промывают волосы теплой водой, затем шампунем, обрабатывают нейтрализующим бальзамом, чтобы удалить остатки краски.

Практикум: Микроскопическое изучение живых (нативных) и окрашенных микробов.

Микроскопический метод в микробиологии. Методические основы.

Микроскопия в световом оптическом микроскопе.

Световой микроскоп состоит из механической и оптической части. Механическая часть микроскопа - это штатив, состоящий из основания и колонки, к которой прикреплены тубус и предметный столик. В колонке имеются две винтовые системы для установки тубуса. Оптическая часть микроскопа состоит из осветительного аппарата, объективов и окуляров. Осветительный аппарат расположен под предметным столиком. В большинстве микроскопов свет отражается от зеркала и, пройдя через линзы конденсора, фокусируется в плоскости препарата. В современных микроскопах освещение достигается с помощью вмонтированного в микроскоп источника света. Объективы представляют собой систему линз в металлической оправе. Передняя (фронтальная) линза - самая маленькая. От нее главным образом зависит увеличение микроскопа. Расположенные за ней линзы называются коррекционными, так как они предназначены для устранения недостатков оптического изображения. При микроскопии объектив погружают в каплю масла, поэтому объектив называют иммерсионным объективом (лат. immercio - погружение), а масло - иммерсионным маслом. Иммерсионный объектив требует особо осторожного обращения. Фронтальная линза имеет настолько короткое фокусное расстояние до исследуемого объекта, что опускать объектив нужно медленно, глядя сбоку, чтобы не раздавить препарат, что связано с порчей линзы. Окуляры имеют две линзы: верхняя называется глазной, а нижняя - собирательной. Окуляры обозначают по тому увеличению, которое они дают, например: х7, х10, х15 и т.д. Предел разрешения оптического микроскопа равен 0,2 мкм.

Окраска микроорганизмов - комплекс методов изучения структуры и морфологии микроорганизмов при микроскопии препаратов, приготовленных из чистых культур или исследуемого материала.

Фиксированные бактерии окрашиваются лучше живых, так как клеточная стенка и цитоплазматическая мембрана живой клетки ограничивают проникновение в нее красителя.

Приготовление окрашенного препарата включает ряд этапов:

1) приготовление мазка;

2) высушивание мазка;

3) фиксацию мазка;

4) окраску;

5) высушивание.

Мазок готовят на чистых предметных стеклах, на середину которых наносят небольшую каплю воды и в нее с помощью бактериологической петли помещают исследуемый материал. Материал распределяют на стекле равномерным тонким слоем, размер мазка -1-2 см 2 .

Препарат обычно высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.

Высушенный мазок подвергается фиксации, при которой мазок прикрепляется к стеклу (фиксируется), а микробы становятся более восприимчивыми к окраске. Способов фиксации много. Наиболее простой и распространенный - фиксация жаром - нагревание на пламени горелки (препарат проводят несколько раз через наиболее горячую часть пламени горелки). В ряде случаев прибегают к фиксации жидкостями (этиловый или метиловый спирт, ацетон, смесь равных объемов спирта и эфира - по Никифорову).

После фиксации мазок окрашивают. Количество краски, наносимое на препарат, должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность мазка. По истечении срока окрашивания (2-5 мин.) краску сливают и препарат промывают водой.

Существуют простые, сложные и дифференциальные способы окрашивания микробов. При простой окраске обычно употребляют одну краску, чаще всего красную - фуксин, или синюю - метиленовый синий. Фуксин красит быстрее (1-2 мин.), метиленовый синий - медленнее (3-5 мин.). Фуксин приготовляют в виде концентрированного карболового раствора (фуксин Циля), очень стойкого и пригодного для окраски в течение многих месяцев. Метиленовый синий приготовляется заранее в насыщенном спиртовом растворе, который стоек и может долго храниться.

Основные виды красителей, которые применяются в микробиологической практике:

Сложные способы окраски, при которых применяются два или более красителя, являются ценными методами, используемыми в микробиологической диагностике инфекционных болезней.

Механизм и этапы окраски по Граму

1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового. Через 1 минуту экспозиции перейти к п.2.

2. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин (йод).

3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 сек. до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

4. Возможно дополнительно промыть мазок водой.

5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин,

6. Промыть водой, высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

Женщины уже давно окрашивают волосы дома, процесс этот достаточно простой, но как и все другие процедуры имеет свои правила особенности и этапы.

Этап 1 – подбор красителя

Выбор красителя зависит от структуры ваших волос и состояния кожи головы, например если на коже головы вы обнаружили ранки или у вас есть кожное заболевание, то окрашивание в таких случаях противопоказано, оно может только усугубить ситуацию.

Для того, чтобы определить цвет волос приподнимите прядь волос и взгляните на нее на просвет, так как в общей массе волосы кажутся темнее, чем они есть на самом деле. Если у вас химическая завивка, то рекомендуется применять тонирующие средства, они придадут блеск волосам и улучшат их структуру.

Этап 2 – тест на восприимчивость красителя

Тест на восприимчивость к краске необходим для того, чтобы определить есть ли у вас аллергия. Проводится он следующим образом: небольшое количество красителя наносится на кожу за ухом на 24 часа. Если в течение этого времени кожа покраснела или появились раздражения, то от краски лучше отказаться.

Этап 3 - Предварительное мытье

Непосредственно перед окраской волос не следует мыть голову, это необходимо чтобы на коже головы осталась жировая прослойка, она защитит волосы и кожу головы.

Если все таки ваша голова слишком грязная, то помойте волосы шампунем без использования бальзама и при этом не мойте кожу головы.

Этап 4 – нанесение красителя

При нанесении краски парикмахеры рекомендуют соблюдать следующие правила:
1. Края лба, а так же височную часть перед окрашиванием смажьте жирным кремом, он защитит эти зоны от окрашивания и раздражения. Так же можно воспользоваться маслом или вазелином.
2. При покраске обязательно надевайте защитные перчатки, так как краска разрушает ногти и кожу рук.
3. Не разводите краску в металлической посуде, так же не используйте металлические инструменты для окрашивания. Краска и металл образуют соединения, которые негативно сказываются на волосах и качестве краски.
4. Смешивать краситель необходимо непосредственно перед нанесением, если краска будет стоять долгое время, то она окислится и интенсивность вашего цвета будет слабее.
5. Для удобства волосы следует разделить на 4 части, разделите макушку двумя перпендикулярными проборами. После этого нанесите краску сначала по проборам, затем переходите к затылочной части. Обычно волосы там темнее, и необходимо дольше времени на их окрашивание. На височные зоны, и на волосы у лба краску наносят в последнюю очередь, так как в этих частях самые тонкие волосы. Если вы решили высветлить отдельные пряди больше остальных волос, то покрасьте сначала их, а затем остальные волосы.
6. При окрашивании в яркие красные тона, краску сначала наносим на волосы по всей длине, не затрагивая при этом корни и кончики, и только потом на эти зоны.
7. Наносите краску быстро, это необходимо, чтобы цвет был равномерным. Процедура окрашивания не должна длиться больше 15 минут.
8. Окрашивайте волосы по прядям, чем гуще у вас волосы, тем тоньше берите пряди, чтобы краска смогла их хорошо пропитать.
9. Если вы красите волосы в светлый цвет, то сначала нанесите краску на отросшие корни и выждите 10-15 минут, затем оставшуюся краску распределите по всей длине.

Этап 5 – смывание краски

Смывать краску следует тщательно, теплой водой, без шампуня и бальзама. Если ваша краска содержит закрепитель цвета или специальный бальзам то используйте его. Промывайте волосы до тех пор пока вода не станет абсолютно прозрачной.

Этап 6 – уход за окрашенными волосами

Любая краска вредит волосам, поэтому для окрашенных волос необходим правильный уход. Если вы хотите сохранить яркость цвета, то используйте маски и шампуни специально для окрашенных волос. Подробнее об уходе за окрашенными волосами читайте .

Изменять цвет волос люди научились еще несколько тысячелетий назад. В те времена процедура окрашивания была довольно длительной и утомительной и проводилась в течение нескольких дней. Сейчас же кардинально изменить цвет шевелюры можно за каких-то час-полтора. И это не все достижения современного окрашивания волос. Технология окрашивания на сегодняшний день настолько продвинута, что вы можете приобрести два, три и даже больше оттенка, не нанося огромного вреду красоте и здоровью шевелюры.

Выбор средств

Если вы хотите скрыть седину или радикально изменить цвет прически, то вам не обойтись без окрашивания волос. Технология окрашивания, а также выбор средств при этом во многом зависят от поставленной цели. По своему воздействию все красящие препараты делятся на три группы:

• Подкрашивающие. К ним относятся различные пенки, бальзамы, шампуни, растительные настойки и отвары. Такие средства используются для временного изменения цвет волос. Они придают нужный оттенок, при этом нанося минимальный урон, ведь в их составе отсутствуют различные агрессивные вещества. Увы, полученный результат держится недолго и исчезает спустя 5-8 процедур мытья головы. Технология окрашивания волос хной, которая также относится к этой группе, позволяет продлить эффект несколько дольше. Кроме того, подобная процедура придает блеск и здоровый вид локонам.
• Полустойкие красители. К таким средствам относят препараты, позволяющие сделать цвет прядей на 2-3 тона темнее или светлее. Допускаются к использованию на ломких и хрупких волосах, так как в их составе не очень много окислителя.
• Стойкие краски. В составе подобных средств присутствует значительная доля перекиси водорода. Это вещество раскрывает чешуйки кератинового слоя каждого волоска, удаляет натуральный красящий пигмент и меняет его на искусственный. При этом локоны частично повреждаются и теряют влагу. После процедуры окрашивания необходимо использовать специальный бальзам, который помогает вернуть чешуйки на место. Но полностью восстановить волосы не удастся. Локоны, на которых применялась стойкая краска, требуют к себе постоянного внимания и заботы.

Смена цвета - довольно серьезный шаг, поэтому очень важно подобрать наиболее щадящие группы красителей и основные технологии окрашивания волос.

Классическое

Покраска шевелюры одним цветом по всей длине называется традиционным окрашиванием волос. Технология окрашивания в этом случае довольно проста, и процедуру можно выполнить самостоятельно в домашних условиях без посещения салонов красоты. Заключается она в следующем:

1. Подбирается соответствующий краситель.
2. Проводится кожный тест с малым количеством средства.
3. Если нет аллергических реакций, то краситель разводится согласно инструкции.
4. Локоны окрашиваются прядь за прядью по всей длине начиная от макушки.
5. Краситель удерживается на волосах в течение времени, указанного на упаковке.
6. Средство обильно смывается водой.
7. Наносится лечащий бальзам, который нужно подержать на волосах в течение 2-3 минут. После этого локоны хорошо промываются водой.

Подобный метод позволяет изменить цвет прически на несколько тонов. Результат процедуры во многом зависит от натурального оттенка локонов. Дело в том, что классическая методика - это не особо сложное окрашивание волос, при котором происходит предварительное обесцвечивание прядей, а обычная замена одного цвета на более темный или светлый. При этом поменять оттенок можно максимум на 2-3 тона, конечно, если вы не блондинка от природы. В остальных случаях для кардинальной смены цвета прядей потребуется процедура, речь о которой пойдет в следующем блоке.

Осветление, или блондирование

Под этой процедурой подразумевают обесцвечивание локонов, при котором окислители полностью удаляют красящий пигмент с каждого волоса. Блондирование может выступать самостоятельным методом смены оттенка прядей на более светлые тона или сопровождать классическое окрашивание волос. Технология окрашивания такая же, как и при традиционной смене цвета локонов.

Состав наносится на волосы и оставляется на нужное время. В процессе процедуры происходит полное удаление натурального пигмента, что делает волосы намного светлей. Блондирование относится к довольно вредным методам, ведь оно наносит ощутимый вред волосам. В дальнейшем они нуждаются в особенном уходе и защите.

Мелирование

На сегодняшний день эта процедура приобрела статус одной из наиболее популярных техник окрашивания волос. Мелирование предполагает плавное или контрастное изменение цвета прядей. Так как при процедуре красящими средствами обрабатываются некоторые локоны, то она считается более щадящей.

Существует 4 типа мелирования:

• Классическое. При подобной процедуре осветляются некоторые прядки, причем их толщина и ширина может меняться. Чтобы придать естественность локонам, второй цвет отличается от естественного на 2-3 тона. И наоборот, чтобы подчеркнуть контраст между прядями, некоторые из них значительно обесцвечиваются. Второй вариант довольно радикален и наносит серьезный вред локонам. Поэтому при сухих и ломких волосах проводить его не рекомендуется.
• Частое. При таком мелировании окрашиваются верхние пряди. Очень эффектно смотрится на темных коротких волосах.
• Обратное. При этой процедуре происходит окрашивание светлых локонов в более темные тона.

Методика мелирования имеет и несколько других разновидностей, и самая популярная из них - это окрашивание волос технологией «Блики». При подобной процедуре не используется фольга, а мастер наносит обесцвечивающую краску кистью, что создает видимость солнечных зайчиков на волосах. Выглядит подобный рисунок очень эффектно и интересно, особенно на темных длинных прядях.

Колорирование

Под такой технологией подразумевают окрашивание прядей в несколько тонов, близких к естественному цвету волос, или, наоборот, резко контрастных. Основное преимущество данной процедуры - это возможность применения ее на любых локонах: темных, светлых, седых, мелированных. Колорирование придает объема прическе и создает яркий незабываемый образ.

Новые технологии окрашивания волос. Омбре

Весьма популярная техника, при которой комбинируется калифорнийское мелирование и вертикальное колорирование. Для волос подбираются основные оттенки - обычно их не больше трех. После чего пряди окрашиваются таким образом, чтобы получился плавный переход от темных корней до светлых кончиков. Омбре - довольно сложное окрашивание волос, поэтому правильно выполнить его может только стилист с большим опытом. В ином случае прическа превратится в пестрый пучок.

Несмотря на то что техника омбре появилась относительно недавно, принято различать несколько видов подобного окрашивания:

• Классическое. В большинстве случаев корни волос остаются нетронутыми или их подкрашивают в более темный цвет. Средняя часть локонов осветляется на 4 тона, кончики - на 8. Для этого типа омбре выбираются цвета, приближенные к естественной палитре.
• Обратное. Такой вид окрашивания эффектно смотрится на волосах средней и короткой длины. В отличие от классического кончики получаются темными, а корни - светлыми.
• Цветное. В этом случае подбираются яркие контрастные оттенки.
• Резкое. Вместо плавного перехода одного цвета в другой создается резкая граница между корнями, серединой и кончиками.

Технология окрашивания омбре на темные волосы не относится к щадящим процедурам, ведь для того, чтобы создать переходы, потребуется радикальное осветление, а также применение стойких красок. Нельзя сказать, что эта методика безопасна для светлых волос. Хотя в этом случае не нужно использовать осветляющие препараты, применения стойких красителей все же не избежать.

Шатуш

Эта методика является, по сути, необычным мелированием. Технология выполнения окрашивания волос в этом случае заключается в следующем: выбираются пряди в хаотичном порядке. После чего они осветляются, но не до корней. Подобная методика создает впечатление немного выгоревших на солнце волос. Процедура занимает не более 40 минут и наносит минимальный вред локонам. Технологией шатуш можно окрашивать волосы любой длины.

Технология окрашивания волос балаяж

Модная разновидность мелирования, при которой осветляют и красят только кончики прядей. Иногда используется несколько вариантов цветов и переход между ними может быть как плавным, так и контрастным. В первом случае красители подбирают под отличающиеся от естественного цвета на 2-3 тона. Во втором же кончики осветляются и красятся в довольно интенсивный и даже экзотический цвет. Особенной популярностью пользуется сейчас «прическа русалки» с зелеными, розовыми и фиолетовыми прядями.

3D-окрашивание

Одна из наиболее популярных разновидностей колорирования. Благодаря этой технологии можно придать значительный визуальный объем прическе. 3D-окрашивание подходит как светловолосым, так и темноволосым девушкам. В идеале, прежде чем выполняется эта технология, производится компьютерное моделирование будущей прически. Но большинство салонов, увы, не имеют нужного оборудования. Так что приходится полагаться на мастерство и безупречный вкус стилиста.

В 3D-окрашивании применяют не более 3 оттенков, при этом один из них основной, а два вспомогательных. Цвета подбирают максимально подходящие друг к другу, а также к естественному тону волос. Контрастные оттенки и резкие переходы недопустимы при этом виде окрашивания волос. Технология окрашивания заключается в следующем:

1. На пряди затылочной части головы от уха до уха наносится основная, более темная краска.
2. Корневая часть остальных волос покрывается тем же тоном.
3. Локоны делятся от затылка ко лбу на небольшие пряди с шириной в 4-5 см.
4. Их окрашивают двумя дополнительными цветами по всей длине, чередуя оттенки между собой.
5. Граница между прядями не должна бросаться в глаза, поэтому волосы вновь делятся на пряди и после чего повторно окрашиваются.

После прохождения процедуры локоны выглядят ярко и естественно, при этом эффект сохраняется достаточно долго. Ведь отрастающие кончики совершенно не портят всю картину. Поэтому нет необходимости повторять 3D-окрашивание чаще, чем раз в месяц.

Иллюминирование волос

При этом методе окрашивания используется специальная устойчивая краска. В ней не нет аммиака и других окислителей, и она не наносит вред локонам. Более того, краска придает блеск и здоровый вид даже поврежденным волосам, а также добавляет объема прическе. Средство очень устойчиво и не смывается более 2 месяцев. После этого срока процедуру рекомендуется повторить. Единственное противопоказание для проведения иллюминирования - густые волосы и жирная кожа головы. В этом случае результат от применения краски выглядит очень непривлекательно.

Трафаретное окрашивание

Довольно смелая технология окрашивания. Во время процедуры красители наносят на локоны с использованием различных трафаретов. В итоге на волосах остаются различные фигуры, геометрические узоры, животные принты и цветочные орнаменты. В общем, любой рисунок, на который хватит фантазии у стилиста.

Методы окраски

4. Промыть водой

Механизм и этапы окраски по Цилю-Нельсону

1. На фиксированный мазок нанести карболовый р-р фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин

2. Снять бумагу, провыть мазок водой

3. Нанести 5% р-р серной кислоты или 3% р-р смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин для обесцвечивания.

4. Промыть водой

5. Докрасить мазок водным р-ом метиленового синего в течении 3-5 мин

6. Промыть водой, высушить и микроскопировать

* Некислоустойчивые – обесцвечиваются и окр. метиленовым синим в голубой цвет, а кислоустойчивые остаются окрашенными фуксином в красный.

Метод Ожешко

Относится к сложным методам окраски и используется для выявления спор бактерий.

Этапы окраски:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогреть в течение 2-3 мин на пламени (для протравливания плотной оболочки споры) до полного испарения кислоты.

2. Высушить и зафиксировать мазок в пламени горелки.

3. Окрасить по методу Циля-Нильсена.

Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).

Окраска по Гиссу

Техника. Препарат, фиксированный любым спосо­бом, кроме жара, красят 5% водным раствором генцианового фиолетового, подогревая до появления паров. Мазок промывают 20% водным раствором медного купороса и сушат.

Микроскопическая картина. Бактерии и капсулы окрашиваются в фиолетовый цвет различной интенсивности.

Требования предъявляемые к петельным средам

Готовые питательные среды должны:

1. удовлетворять потребностям обмена веществ микробной клетки;

2. легко усваиваться бактериями;

4. быть стерильными;

5. иметь оптимальную рН;

6. иметь достаточную влажность (плотная среда должна иметь не меньше 60% влаги);

Классификация питательных сред

По составу питательные среды подразделяются на естественные, искусственные и синтетические.

Естественные среды состоят из натуральных продуктов животного или растительного происхождения. Основой таких сред являются молоко, яйца, овощи, животные ткани, желчь, сыворотка крови. На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в таких средах имеются все компоненты для их роста и размножения.

Синтетические среды – это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь большой набор компонентов, но могут быть и простыми по составу. Эти среды удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращения в соответствующие продукты обмена.

По консистенции среды бывают жидкие, полужидкие, плотные, сыпучие и сухие.

Жидкие среды применяют для изучения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена микроорганизмов. Примером наиболее часто применяемой жидкой питательной среды является мясо-пептонный бульон (МПБ).

Для его приготовления сначала готовят мясной отвар. С этой целью свежее мясо (говядину, телятину) освобождают от костей и сухожилий, пропускают через мясорубку. 500 г такого фарша заливают 1 л водопроводной воды и оставляют на 24 часа для экстрагирования необходимых для питания микроорганизмов веществ. Затем мясо отжимают через марлю и полученный настой кипятят в течение 30 минут для свёртывания белка, который отделяют фильтрованием. Отфильтрованный настой стерилизуют. Стерильная мясная вода является основой для приготовления мясо-пептонного бульона. Для этого к 1 л мясной воды добавляют 10 г пептона и 5 г NaCl. Пептоны добавляют взамен свернувшегося белка. Они являются продуктами неполного разрушения белка, получаемыми кислотным или ферментативным гидролизом мяса или молочного казеина. Преимуществом этих источников аминокислот является то, что они легко усваиваются и при стерилизации не свёртываются. Поэтому стерильный бульон остаётся прозрачным.

Рост микроорганизмов в таких средах легко отмечается визуально по появлению мутности. МПБ – богатая питательная среда, но в ней мало углеводов.

Плотные среды необходимы для выделения и изучения свойств чистых культур микроорганизмов, так как на них можно получить изолированный рост отдельных клеток. Плотные питательные среды (мясо-пептонный агар (МПА)) готовят из жидких посредством добавления к ним агар-агара. Агар-агар (по малайски – желе) получают из водорослей. Это сложный полисахарид, который образует гель с точкой плавления 96 – 100 ºС и температурой застывания 40 ºС. Несколько циклов плавления и затвердевания не влияют на способность агара образовывать гель, поэтому агаровые среды можно несколько раз стерилизовать.

Плотные питательные среды получают, добавляя к жидким 1-2% агар-агара. Среду с внесённым в неё агаром нагревают на водяной бане до расплавления последнего. Полученный горячий раствор фильтруют через гигроскопическую вату и разливают по чашкам Петри и пробиркам.

Сухие питательные среды изготовляются в виде сухих порошков, которые хорошо растворяются в воде при комнатной температуре. Преимущество таких сред в их стандартности, стабильности, простоте приготовления и удобстве при транспортировке. Сухие питательные среды представляют собой гигроскопические порошки, хранящиеся в специальных флаконах. В лаборатории из порошков готовят соответствующие питательные среды по прописи указанной на этикетке. Чаще всего применяют сухой питательный агар, среду Эндо.

По назначению среды подразделяются на обычные (простые), специальные, элективные, дифференциально-диагностические.

Обычные (простые) среды используют для культивирования большинства микроорганизмов. Это мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА).

Специальные среды – это среды, предназначенные для выявления тех или иных микроорганизмов или получения культуры микроорганизмов, обладающих особыми свойствами.

Среди специальных сред различают:

1. элективные (избирательные)

2. дифференциально-диагностические (индикаторные) среды.

Элективные среды (от латинского слова electus – избираю) подобраны таким образом, чтобы обеспечить оптимальные условия для выращивания определённых микроорганизмов. В них могут быть добавлены вещества, избирательно подавляющие развитие сопутствующей микрофлоры. При посеве материала, содержащего смесь различных микроорганизмов, раньше всего проявляется рост того вида, для которого данная среда будет избирательно пригодна.

Сопутствующие микроорганизмы или совсем не растут на таких средах, или развитие их задерживается. Такие среды применяют для выделения микробов определённых видов из объектов, содержащих постороннюю микрофлору.

Например, холерный вибрион может развиваться в присутствии относительно высокой концентрации щелочи(1%), губительно действующей на сопутствующую. Дифтерийная палочка опережает по быстроте роста на свёрнутой кровяной сыворотке Лёффлера сопутствующую микрофлору зева.

Методика посева на искусственные питательные среды

Посев на плотную среду

Если необходимо произвести посев на твердую питательную среду, например на «косой агар», то материал наносят на поверхность среды при помощи легких зигзагообразных движений петли. В том случае, если производят посев анаэробов, делают укол иглой, зараженной микробами, в центральную часть среды, застывшей в виде столбика (рис. 57). Пробирку при этом держат в опрокинутом вверх дном положении или под углом, чтобы уменьшить опасность загрязнения среды из воздуха. Посев нужно делать именно уколом, а не разрывать поверхность среды и не касаться ее рукояткой иглы.

Метод истощающего штриха

В целях экономии сред и посуды можно пользоваться одной чашкой, разделив её на 4 сектора и последовательно засеяв штрихом. Для этого материал берут пет­лёй и проводят ею на расстоянии 5 мм друг от друга ряд параллельных штрихов сна­чала по поверхности первого сектора, а затем последовательно оставшимися на пет­ле клетками засевают все другие секторы. При каждом последующем штрихе про­исходит уменьшение количества засеваемых клеток. После рассева чашки перевора­чивают вверх дном, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки Петри, не мешала получить изолированные колонии. Чашки выдерживают в термостате 1-7 суток, так как скорость роста различных микроорга­низмов неодинакова.

Таким образом, в первых секторах получается сплошной рост, а вдоль после­дующих штрихов вырастают обособленные колонии, представляющие собой потом­ство одной клетки.

Метод прогревания

Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогре­вают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 минут. При этом поги­бают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают, образуя колонии только спорообразующих бакте­рий.

Метод обогащения

Исследуемый материал засевают на элективные питательные среды, способст­вующие росту определенного вида микроорганизмов.

Метод Шукевича

Применяется для выделения подвижных микроорганизмов. Исследуемый ма­териал засевают в конденсационную воду скошенного агара, находящегося в про­бирке. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы "вползают" на его поверхность. Из верхней час­ти роста производят высев в конденсационную воду свежей питательной среды. Производя таким образом несколько пересевов, в конце концов получают чистую культуру подвижной бактерии.

Метод ингибирования

Основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиоти­ков на микроорганизмы. Определённые вещества угнетают рост одних микроорга­низмов и не оказывают влияния на другие. Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные.

Этап 1

А. Забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала. Иногда до посева проводят селективную обработку материала с учетом свойств выделяемого микроорганизма. Например, перед исследованием мокроты или другого материала на присутствие кислотустойчивых микобактерий туберкулеза, материал обрабатывают растворами кислот или щелочей.

Б. Посев в среду обогащения (при необходимости).Его проводят, если в исследуемом материале содержится малое количество бактерий, например, при выделении гемокультуры. Для этого кровь, взятую на высоте лихорадки в большом объёме (8–10 мл у взрослых, 4–5 мл у детей) засевают в среду в соотношении 1:10 (для преодоления действия бактерицидных факторов крови); посев инкубируют при температуре 37 0 С 18-24 ч.

В. Микроскопия исследуемого материала. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микроскопируют. Оценивают присутствующую микрофлору, ее количество. В ходе дальнейших исследований должны быть выделены микроорганизмы, присутствовавшие в первичном мазке.

Г. Посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний. Производят посев материала петлёй или шпателем методом механического разобщения на чашку с дифференциально-диагностической или селективной средой с целью получения изолированных колоний. После посева чашку перевора­чивают дном кверху (чтобы избежать размазывания колоний капельками конденсационной жидкости), подписывают и помещают в термостат при температуре 37 0 С на 18-24 ч.

Этап 2

А. Изучение морфотипов колоний на средах, их микроскопия. Просматривают чашки и отмечают оптимальную питательную среду, скорость роста, характер роста микроорганизмов. Для изучения выбираютизолированные колонии, расположенные по ходу штриха, ближе к центру. Если вырастает несколько типов колоний – каждый исследуется в отдельности. Оценивают признаки колоний (табл. 7). При необходимости чашки с посевамипросматривают через лупу или с помощью микроскопа с объективом малого увеличения и суженной диафрагмой. Изучают тинкториальные свойства отличающихся морфотипов колоний, для этого из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму или другими методами, микроскопируют и определяют морфологию чистоту культуры.При необходимости ставят ориентировочную РА на стекле с поливалентными сыворотками.

Б. Накопление чистой культуры. Для накопления чистой культуры изолированные колонии всех морфотипов пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой и инкубируют в термостате при +37 0 С (такая температура оптимальна для большинства микроорганизмов, но может быть и другой, например, для Campylobacterium spp. – +42 0 C, Candida spp. и Yersinia pestis – +25 0 C).

В качестве среды накопления для энтеробактерий обычно используют среду Клиглера.

Состав среды Клиглера: МПА, 0,1% глюкозы, 1% лактозы, реактив на сероводород (сернокислое железо + тиосульфат натрия + сульфит натрия), индикатор феноловый красный. Изначальный цвет среды малиново-красный, среда «скошена» в пробирках: имеет столбик (2/3) и скошенную поверхность (1/3).

Посев в среду Клиглера производится штрихом по поверхности и уколом в столбик.

Этап 3.

А. Учет роста на среде накопления, оценка чистоты культуры в мазке по Граму.Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нём в разных полях зрения обнару­живаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Однако в случае выраженного плеоморфизма, присущего неко­торым видам бактерий, в мазках из чистой культуры могут встречаться одновременно клетки с различной морфологией.

Если в качестве среды накопления использовали индикаторную среду Клиглера, то оценивают изменения ее цвета в столбике и скошенной части, по которым определяют биохимические свойства: ферментацию глюкозы, лактозы и продукцию сероводорода. При разложении лактозы желтеет скошенная часть среды, при разложении глюкозы – желтеет столбик. При образовании CO 2 в процессе разложения сахаров образуются газовые пузырьки или разрыв столбика. В случае продукции сероводорода отмечается почернение по ходу укола из-за превращении сульфата железа в сульфид железа.

Характер изменения цвета среды Клиглера (рис. 23) объясняется неодинаковой интенсивностью расщепления микроорганизмами азотистых веществ и образования щелочных продуктов в аэробных (на скошенной поверхности) и анаэробных (в столбике) условиях.

В аэробных условиях на скошенной поверхности происходит более интенсивное щелочеобразование, чем в столбике среды. Поэтому при разложении глюкозы, присутствующей в среде в небольшом количестве, образующаяся на скошенной поверхности кислота быстро нейтрализуется. В то же время при разложении лактозы, присутствующей в среде в высокой концентрации, щелочные продукты не способны нейтрализовать кислоту.

В анаэробных условиях в столбике щелочные продукты образуются в ничтожном количестве, поэтому здесь выявляется ферментация глюкозы.

Б. Окончательная идентификация чистой культуры (определение систематического положения выделенного микроорганизма до уровня вида или варианта) и определение спектра чувствительности выделенной культуры к антибиотикам.

Для идентификации чистой культуры на этом этапе изучают биохимические, генетические, серологические и биологические признаки.

Методы окраски

Механизм и этапы окраски по Граму

1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин снять ее, а краситель слить.

2. Нанести раствор люголя на 1-2 мин (йод)

3. Обесцветить этиловым спиртом в течении 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

4. Промыть водой

5. Докрасить водным р-ом фуксина в течении 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

* Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.